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原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

簡要描述:
原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑采用的是新型小分子多肽材料,其特點是非脂質(zhì)體材料,大小是80nm左右,由于形狀是圓形的,不會對細(xì)胞有物理性損傷,材料表面有特異性結(jié)合接頭,特異性接頭與核酸形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物,轉(zhuǎn)染復(fù)合物通過細(xì)胞主動吞噬進入細(xì)胞,對細(xì)胞無內(nèi)毒素影響,不易出現(xiàn)細(xì)胞死亡。轉(zhuǎn)染效率高,適用細(xì)胞種類多,可轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA和小動物活體轉(zhuǎn)染。

更新時間:2024-06-26

訪問量:1315

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:美國

<strong>原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑</strong>

原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑


一、產(chǎn)品說明:

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號:AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150

規(guī)格:0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。

 

二、使用說明:

1、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素 )

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。


三、注意事項:

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,內(nèi)毒素對細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒)。

3、復(fù)合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋,只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,如果進行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液,不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6、原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時,細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。


原代輸卵干管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑


轉(zhuǎn)染操作方法


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轉(zhuǎn)染試劑用量推薦

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