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    染料排斥法測定細胞生存力實驗

    發(fā)布時間: 2022-12-13  點擊次數(shù): 927次

    原理

    萘黑、臺盼藍以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過活細胞。

    將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢査。

    材料與儀器

    胰蛋白酶
    巴斯德吸管 顯微鏡 手執(zhí)計數(shù)器 生存力染料 血細胞計數(shù)板

    步驟

    材料

    無菌

    受試細胞,如胰蛋白酶消化的貼壁細胞、融化冷凍的細胞或原代離散的細胞
    合適的生長液 20ml
    0.25% 胰蛋白酶 5ml
    D-PBSA10ml

    非滅菌

    血細胞計數(shù)板
    生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍或 1% 萘黑)
    巴斯德吸管
    顯微鏡
    手執(zhí)計數(shù)器

    操作步驟

    1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸,制備高濃度的細胞懸液(約1X106 個/ml)。

    2. 取一塊干凈的血細胞計數(shù)板,將蓋玻片間定在適當位置上。

    3 . 將一滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻。

    4 . 加至血細胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

    5 . 靜置1~2min (但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

    6 . 將計數(shù)板置于顯微鏡下,選擇10X 物鏡,利用網(wǎng)格線聚焦。
    7 . 計數(shù)細胞總數(shù)以及著色細胞數(shù)。

    8 .清洗血細胞計數(shù)板,放人盒內(nèi)。

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